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Feb
IF:7.
Introduction
胶质母细胞瘤(GBM)本身造成的免疫逃避和抑制是阻碍现有免疫疗法有效对抗GBM的主要因素。GBM在大脑内创造了一个免疫抑制微环境，从而在逃避机体免疫系统的同时促进了病变的生长和恶性特性。因此，在GBM中使用免疫疗法来抵消这些效应是很有意义的。程序性细胞死亡1(PD-1)及其配体程序性细胞死亡配体1(PD-L1)通过促进T细胞凋亡和诱导Tregs来介导肿瘤的免疫抑制效应。针对PD-L1和PD-1的抗体疗法已被证明通过逆转几种抗PD-1抗体的免疫抑制作用而发挥抗肿瘤作用。
ResultsPD-L1在胶质母细胞瘤中的表达
在胎盘和PD-L1转染HEK的阳性对照上，我们发现了特异性膜染色(图1A-C)。然后对GBMTMA进行EPR(2)染色，显示PD-L1的膜特异性染色(图1D)。通常，PD-L1表达在小圆形细胞上，类似于淋巴细胞，淋巴细胞最多占阳性细胞的28.6%(平均6.28%)(图1D)。
PD-L1先前已被证明在T细胞上表达，并在树突状细胞成熟中发挥作用。我们还在胶质母细胞瘤内的其他多形性细胞上发现细胞表面染色(图1E)。胶质母细胞瘤中PD-L1表达细胞的中位数为2.77%(范围：0%~86.6%；n=94)。值得注意的是，淋巴细胞上PD-L1表达的中位数为69.8%。大多数GBM患者(60.6%)有至少1%或更多PD-L1阳性细胞的肿瘤；38.3%有至少5%或更高的PD-L1表达，17%有25%或更高的表达，5.32%有50%或更多的PD-L1阳性细胞。
PD-L1在胶质母细胞瘤中表达的验证
为了确定是否准确评估PD-L1的表达，接下来使用第二种方法来确认PD-L1阳性细胞在GBM中的频率。用流式细胞术直接体外染色GBMs显示，PD-L1表面表达细胞的中位数为3.5%(范围：0.64-6.7；n/5)(图1F)。接下来，使用流式细胞术对GBM的CD4和CD8T细胞进行分类，发现这两个群体都表达PD-L1和PD-1(图2)。
为了确定GSC是否是PD-L1表达的贡献者，测试了一个小组，发现PD-L1表达最低；然而，在实验室胶质瘤细胞系，如GL和U87(图3)中观察到PD-L1的表达。
PD-1/PD-L1轴表达是胶质母细胞瘤预后不良的指标
根据PD-1和PD-L1mRNA的相对表达将患者分为百分位数，然后根据P值0.05，分为低mRNA组和高mRNA组。对于PD-L1和PD-1，我们发现高表达与显著缩短生存期相关(分别为P.和P.)(图4A)。
采用Cox比例风险模型分析总生存期(OS)和PD-L1表达水平(以0.37为界值分为低和高)和年龄(65岁分为年轻和老年)之间的关系。通过单变量回归分析，这两个因素都有统计学意义，并被包括在多变量回归模型中。PD-L1表达水平高的患者与相对表达水平低的患者相比，估计的死亡风险更高(危险比
=1.54；95%CI=1.05-2.28；P=.1)。与年轻患者相比，年龄较大的患者的估计死亡风险更高(HR=1.7；95%CI=1.16-2.49；P=.)。多因素分析显示PD-L1和年龄均为影响生存的独立因素(PD-L1高低：HR=1.52；95%CI=1.03~2.25；P=.；年龄大小：HR=1.68；95%CI=1.14-2.47；P=)。
为了进一步从蛋白水平评估PD-L1对预后的影响，我们分析了PD-L1的免疫组织化学表达及其与生存期的关系。使用中位数作为截断点，我们发现2.77%的PD-L1阳性患者有恶化OS的趋势(P=.)。然而，使用5%的阳性细胞作为截断值时，发现高表达与显著缩短的生存期有关(P=.)(图4B)，验证了mRNA数据。当我们分析PD-1和PD-L1低表达组合与PD-1和PD-L1高表达组合的生存mRNA时，我们发现两者的高表达组合也与较差的生存相关(P=.)(图4C)。
细胞溶解活性标志物与免疫抑制因子的表达
最近的研究结果表明，细胞溶解活性与免疫抑制标志物的表达有关。因此，评估了颗粒酶A和穿孔素1等T细胞溶解活性的替代标志物对存活率的影响，并与PD-L1的表达特异性地相互作用(图5)。我们发现颗粒酶A(图5A)的高表达，穿孔素1(图5B)和PD-L1(图4B)是相对低表达患者生存率较低的指标，包括联合使用(图5C和D)。这些结果可能是因为穿孔素1(PRF1)与PD-L1(CD)(r=0.34；P.；图6A)；穿孔素1与PD-1(PDCD1)(r=0.37；P.；图6B)；颗粒酶A(GZMA)和PD-1(r=0.54；P.；图6C)以及颗粒酶A与穿孔素(r=0.55;P.;图6D)有很强的协同表达。我们还检查了PD-1和PD-L1与T细胞标志物如CD3、CD4和CD8的相关性。正如预期的那样，PD-1与包括CD3、CD4和CD8在内的T细胞亚群的所有标记物相关。有趣的是，免疫组织化学和体外流式细胞术证实了PD-L1与CD3(r=0.21；P=.)和CD4(r=0.33；P0.)指示与抑制/耗尽的T细胞和/或Treg的关联。
Conclusion
PD-L1在GBM患者中的表达是频繁的，但很大程度上局限于少数亚群-类似于其他已被描述为PD-L1表达的恶性肿瘤。PD-L1高表达与预后不良相关，PD-L1阳性和阴性患者的合理分层可能成为GBM高质量免疫治疗试验的重要标准。浸润淋巴细胞上PD-L1的表达也提示在GBM中可能存在一种独特的免疫抑制途径。
Reference
D-L1expressionandprognosticimpactinglioblastoma
PMID：
DOI：10./neuonc/nov
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